发酵工艺标准操作流程(SOP)

一、生产前准备 每次生产前按品种配方将所需原料称重准备齐全,并确认生产原料库 存量,保证原料库存量足够下次生产所需. 
二、生产前检查 
1 检查蒸汽、压缩空气、冷却水进出的管路是否畅通,所有阀门是否良 好,并关闭所有阀门. 
2 检查电路、控制柜、开关的状态,确保控制柜运行正常. 
3 检查空压机油表油表及轴承、三角带、气缸等是否正常,确保空压机 运行正常. 
4 检查发酵罐搅拌减速机的油量及密封轴降温水是否正常. 
三、总过滤器灭菌 
当蒸汽总管路上的压力为 0.2-0.25MPa 时,打开总过滤器进气阀输入 蒸汽,同时打开出气阀的跑分阀、排气阀、排污阀,当三个阀均排出蒸 汽时,调整进气阀、排污阀,稳定总过滤器压力 0.15-0.2MPa,此时打开 压力表下跑分,计时灭菌 2-2.5 小时.灭菌结束后启动空压机,当空气输 入管道压力大于总过滤器压力时,关闭蒸汽阀,打开空气阀,将空气出 入总过滤器,然后调整进气阀与排污阀,稳定总过滤器压力在 0.15-0.2MPa,保持通气在 15-20 小时,当出气阀跑分和排污阀放出的空 气为干燥空气时,完成灭菌.
四、分过滤器灭菌
1 当蒸汽管路压力为 0.2-0.25MPa 时,打开蒸汽过滤器的进气阀和排污 阀,当蒸汽管路中无蒸汽凝结液后,再将蒸汽输入空气管路,然后打开 分过滤器的进气阀、排污阀及出气阀上的跑分,当所有阀门均有蒸汽 排出后,调整进气与排污阀,是压力稳定在 0.11-0.15MPa,计时灭菌 30-35 分钟.灭菌结束后,关闭蒸汽过滤器进出气阀、排污阀,并立即将 空气输入预过滤器,使空气通过预过滤器进入到分过滤器,再调整分过 滤器排污阀使压力稳定在 0.11-0.15MPa,备用. 
五、发酵罐空消(可与分过滤器灭菌同时进行) 
空消前先将发酵罐去垢洗净,添加少量清水,然后密封进料口,将排气 阀打开少许,同事将蒸汽引入盘管(或夹套)进行预热,待罐温升到 80℃ 时(种子罐 40℃即可),关闭盘管(或夹套)进气阀,再从出料口、进气口、 取样口三路输入蒸汽,(蒸汽管路压力不低于 0.2-0.25MPa),当罐内温度 达到 125-130℃时,通过三路蒸气浴出气阀调整罐内压力,使其稳定在 0.11-0.15MPa,计时灭菌 30-35 分钟.空消结束后,关闭所有进气阀并将 排气阀开大,当罐内压力下降至 0MPa 后,打开进料口和排污阀,再将发 酵罐进行一次冲洗. 六、发酵罐实消 打开进水阀,按照生产要求放入所需水量,再根据生产品种按配方依次 投入培养基原料,并同时打开搅拌,搅拌 5-10 分钟后取样,用氢氧化钠 和浓盐酸调 PH 值 7.2-7.5 之间,然后密封进料口将排气阀打开少许,同 时打开盘管(或夹套)的进出气阀门输入蒸汽进行预热,等到罐内温度 到达 80℃以上后,关闭盘管(或夹套)进气阀门,并将排气阀关小,然后将蒸汽从进气口、出料口、取样口三路直接通入罐内,当罐内温度上升 到 121-125℃后,打开发酵罐体上与空气进气阀上的所有跑分,再通过调 整三路进气与排气阀将罐内压力稳定在 0.11-0.15MPa,此时开始计时 灭菌 30-35 分钟,灭菌期间将搅拌停止.灭菌结束后,关闭所有进蒸汽阀 门,将排气阀开大,同时开启搅拌,并立即打开进气阀,输入无菌空气,保 证罐压不低于 0.05-0.06MPa(当发酵罐通入无菌空气后,一定注意分过 滤器与空气总管路压力一定要大于发酵罐内压力),打开盘管(或夹套) 冷却水进出阀门(确定蒸汽出阀门关闭),开始降温,按照不同菌种接种 温度要求控制降温结束时间(一般在 34℃左右),降温结束后即可接种.
七、接种 
1、种子罐接种 先将进气阀逐渐关闭,同时将排气阀开大,当罐体压力表与空气流量计 降到 0 刻度时,关闭排气阀,用酒精棉围在接种口四周并点燃,然后打开 接种口,将制备好的菌种孢子悬浮液在火焰中直接从接种口倒入罐内, 马上关闭接种口,同时迅速打开进气阀使罐内压力上升到 0.05MPa 以 上,打开排气阀,调整进气与排气阀使罐内压力稳定在 0.05-0.06MPa 2、培养罐接种 接种前应先将蒸汽输入接种管道,再把接种管道两端的跑分打开,当跑 分都有蒸汽排出时,计时灭菌 15-30 分钟,灭菌结束后关闭跑分和进蒸 汽阀,将种子罐排气阀关小,当种子罐内压力大于培养罐压力后,先将 接种管道进口阀门打开,再打开培养罐端出口阀开始接种,接种量按不 同菌种生产需求控制.接种完毕后,先将培养罐端出口阀关闭,再将接种管道进口阀关闭,完成接种,最后把种子罐所有进出气阀门关闭,停止搅拌. 
八、发酵罐培养控制 
接种后调整进气阀与排气阀,将罐内压力稳定在 0.05-0.06MPa,同时按 照不同菌种的需求调整好罐内的温度和通气量 当罐内温度超出或者低于标准温度时,打开盘管或夹套进出阀门,出入 冷却水或者蒸汽,等温度达到标准温度后关闭进出阀门,停止冷却水或 者蒸汽的输入,这就完成了一次温度的控制调整. 通气量的控制,按照不同菌种的要求,在确保管内压力稳定的前提下, 根据空气流量计的显示,通过进气阀和排气阀的调整进行通气量的调 整. 冬季结冰期到来以后,每次生产停止后,应把蒸汽和空气管路及发酵罐 盘管或者夹套的冷凝水和冷却水排尽,排不尽的可用空气把水吹出来, 以防止冻裂管路和设备,给生产造成不便. 
九、取样与放罐 
取样检测时间,按照生产菌种的种类来制定 12-16 小时不等,开始取样 检测后,前期每 2 小时一次,后期取样时间缩短为 0.5-1 小时,每次取样 前后都要对取样口进行 10-15 分钟灭菌处理,.当取样检测,发现符合芽 孢大量形成,芽孢含量≥70%,杂菌量≤3%,含菌量≥30*108CFU/ml 的放罐 指标时,即可放罐. 
十、发酵生产流程记录 
在发酵生产过程中,从生产准备—生产前检查—空气过滤器灭菌—发酵罐空消—发酵罐实消—接种—培养控制—放罐等每一个工艺流程环 节,必须有详细的操作记录,放罐后应将表交到质量控制中心存档,生 产记录保存三年.